誘發(fā)腫瘤動物模型的建立
原理：誘發(fā)性腫瘤動物模型是指研究者用化學(xué)致癌劑、放射線、致癌病毒誘發(fā)動物的腫瘤等。
實驗材料：腫瘤細胞、小鼠
試劑：無血清培養(yǎng)基質(zhì)、3%中性甲醇、石臘等
儀器耗材：低溫離心機、血球計數(shù)器、游標(biāo)卡尺等
實驗步驟
一、肝癌
1．二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)大白鼠肝癌
（1）取體重250 g左右的封閉群大白鼠，雌雄不拘；
（2）按性別分籠飼養(yǎng)。除給普通食物外，飼以致癌物，即用 0.25%DEN水溶液灌胃，劑量為10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由飲用；
（3）共約4個月可誘發(fā)成肝癌；
（4）也可以單用0.005%摻入飲水中口吸服8個月誘發(fā)肝癌。
2．4-2甲基氨基氮苯（DBA）誘發(fā)大鼠肝癌
（1）用含0.06%DBA的飼料喂養(yǎng)大鼠，飼料中維生素B2 不應(yīng)超過1.5～2 mg/kg；
（2）4～6月就有大量的肝癌誘發(fā)成功。
3．2-乙酰氨基酸（2AAF）誘發(fā)小鼠、狗、貓、雞、兔肝癌
（1）給成年大鼠含0.03% 2AAF標(biāo)準(zhǔn)飼料；
（2）每日每平均2～3 mg 2AAF（也可將2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%動物產(chǎn)生肝腫瘤。
4．二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝癌：
（1）用劑量為每日0.3～14 mg/kg體重，混于飼料或飲水中給予；
（2）6～9個月后255/300大鼠發(fā)生了肝癌。
5．亞胺基偶氮甲苯（OAAT）誘發(fā)小鼠肝癌
（1）用1%OAAF苯溶液（約0.1 ml含1 mg）涂在動物的兩肩胛間皮膚上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
（2）實驗后7～8周即而出現(xiàn)第一個肝腫瘤，7個月以上可誘發(fā)小鼠肝腫瘤約55%。
（3）或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，給C3H小鼠皮下注射4次，每日間隔10天，也可誘發(fā)成肝癌。
6．黃曲霉素誘發(fā)大鼠肝癌
（1）每日飼料中含0.001～0.015 ppm，混入飼料中喂6個月后，肝癌誘發(fā)率達80％。
二、胃癌
1．甲基膽蒽誘發(fā)小鼠胃癌
（1）取20 g左右的小鼠，無菌手術(shù)下，在腺胃粘膜面穿掛含甲基膽蒽（MC）線結(jié)。
（2）含MC的線結(jié)是用普通細線，在一端打結(jié)后，將線結(jié)置于盛有MC小玻璃試管內(nèi)，在酒精燈上微微加溫，使MC液化滲入線結(jié)。MC濃度為0.05～0.1 g 20-甲基膽蒽內(nèi)浸入10～20根線。
（3）手術(shù)埋線后4～8個月可誘發(fā)成功胃癌。
2．不對稱亞硝胺誘發(fā)小鼠胃癌
劑量為0.25 ml/kg體重，3個月后全部動物發(fā)生前胃乳頭狀癌，7～8個月后有85～100%發(fā)生前胃癌。昆明種最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。
3．甲基亞硝基醋酸尿素誘發(fā)小鼠胃癌
給BD大鼠飲水中加甲基亞硝基醋酸尿素，劑量為2 mg/kg體重，每周飲用5次，520天后全部大鼠均發(fā)生了腺胃癌。
三、食管癌
1．甲基芐基亞硝胺（MBNA）誘發(fā)大鼠食管癌
（1）取體重100 g以上的Wistar大鼠；
（2）任其食用含甲基芐基亞硝胺的飲水，并將MBNA摻入飼料中使每日攝入量達0.75～1.5 mg/kg體重；
（3）80～100天可誘發(fā)成食管癌。
2．二烴黃樟素（Dihydrosafrole）誘發(fā)大鼠食管癌
（1）二烴黃樟素是一種制備啤酒的調(diào)味品，在大鼠飼料中加入百萬分之二千五百至一萬（2500～10000 ppm）黃樟素，就能引起20～75%的食管癌。
3．甲基芐基亞硝胺誘發(fā)大鼠食管癌
（1）用0.2%或0.005% 的甲基芐基亞硝胺水溶液，給動物經(jīng)口灌喂，每天一次，大鼠灌注劑量為1 mg/kg體重；
（2）至第27天即發(fā)現(xiàn)一例食管乳頭狀瘤，154天發(fā)現(xiàn)第一例食管癌， 11個月食管癌的發(fā)生率為53%。
四、肺癌
1．二乙基亞硝胺（DEN）誘發(fā)小鼠肺癌
（1）小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次劑量56 mg/kg，DEN總劑量達到868 mg；
（2）觀察時間為100天左右時，發(fā)癌率可達40%。
（3）DEN總劑量達到1176 mg，觀察時間為半年左右時；發(fā)癌率可達94%。
2．烏拉坦誘發(fā)肺腺癌
（1）小鼠（A系， 1～11/2月齡）較大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%烏拉坦生理鹽水液0.1～0.3 ml，間隔3～5日再注，共注2～3個月，每只小鼠用量約為 100 mg；
（2）注后3個月肺腺癌發(fā)生率為100%，而且多數(shù)為多發(fā)性，這種誘發(fā)瘤為良性。
3．苯并芘誘發(fā)肺腺癌
（1）猴氣管內(nèi)注入3，4-苯并芘（苯并花為3～15 mg與等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次；
（2）6只猴中有2只誘發(fā)肺的鱗狀上皮癌。
4．硫酸銨氣溶膠誘發(fā)肺腺癌
（1）用硫酸胺氣溶劑給100只大鼠吸入；
（2）13個月后所有大鼠都發(fā)生了肺腺癌。
5．甲基膽蒽誘發(fā)肺腺癌
（1）用0.2%明膠作懸浮劑將甲基膽蒽混合后給金地鼠氣管內(nèi)注入，每次0.1 ml（含甲基膽蒽 5 mg）每周一次，共6次；
（2）53周后有62.5%動物發(fā)生了肺癌。
五、鼻咽癌
1．二甲基膽蒽（MC）誘發(fā)大鼠鼻咽癌
（1）取直徑2～3 mm的硬質(zhì)塑米管，在酒精燈上小火拉成錐形，每段長約3.5 cm，管內(nèi)填以結(jié)晶體MC。
（2）小管一端用火封閉，以防藥物外溢，尖端用針刺數(shù)孔，使MC能從小妃溢出。
（3）取體重120 g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由前鼻孔將上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔較小管粗端為小的特點，稍加用力，迫使小管全部進入鼻腔內(nèi)，其尖部可達鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管長期留于鼻腔內(nèi)。
（4）待到預(yù)定時間（半年以上），或動物自行死亡時，到其鼻咽部，10%福爾馬林固定，脫鈣后，石蠟包埋，進行連續(xù)切片。發(fā)癌率可達60%以上。
2．二乙基亞硝胺滴鼻法誘發(fā)鼻咽癌
（1）取120 g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平針尖的8號針頭，從前鼻孔輕輕插入，針尖可達鼻咽腔；
（2）經(jīng)注射器灌注用1%吐溫-80新配的 33.3%DEN混懸液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每周1次，共15～20次，可誘發(fā)成鼻咽癌。
六、宮頸癌
1．二甲基膽蒽（MC）誘發(fā)宮頸
取雌性小白鼠，以附有0.1 mgMC的棉紗線結(jié)在動物不麻醉的狀態(tài)下，借助于陰道擴張器及磨純的彎針，將線穿入宮頸。經(jīng)右宮角背部穿出，使線結(jié)固定于宮頸口。線的另一端則固定于背部肌肉，縫合皮膚，掛線以后，同日開始連續(xù)注射青霉素2～3天。以防術(shù)后感染。至一定時間（半年左右）處死動物，宮頸組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)切片。
七、結(jié)腸癌
1．二甲基芐肼（Dimethlhydrazine，DMH）誘發(fā)鼻咽癌
（1）給四周齡的雄性大白鼠，皮下注射二甲基芐肼（Dimethlhydrazine，DMH）每周一次，連續(xù)21周，每次 DMH21 mg/kg；
（2）最后一次給藥后1～4周，處死動物；
（3）降結(jié)腸部位用Bouin液固定，脫水，石蠟包埋，切片。所用之DMH先配成每100 ml含 400 mg的母液，并加EDTA37 mg，用氫氧化納（0.1 N）液將pH調(diào)至6.5備用。
注意事項
1．要設(shè)計不同的實驗組和對照組， 每組動物數(shù)一般為 5-10 只；
2．一般接種腫瘤6-8 周后，小鼠的腫瘤可生長至直徑為 15-20mm ( 即小鼠會瀕臨死亡) 時， 可眼球取血，分離血清并保存血清， 處死小鼠， 取腫瘤組織照相， 取部分腫瘤組織作 冰凍組織切片( 或- 80℃ 保存)， 作相應(yīng)的免疫組織化學(xué)染色 ， 取部分腫瘤組織用3%中性的甲醛固定， 石臘包埋， 作常規(guī)HE 染色。
其他說明
1．芳香胺及偶氮染料類致癌物的特點
（1）通常需要長期、大量給藥才能致癌；
（2）腫瘤多發(fā)生于遠隔作用部位的器官如膀胱、肝等；
（3）有明顯的種屬差異；
（4）其本身不是直接致癌物，致癌是由于其某種代謝產(chǎn)物的作用；
（5）其致癌作用往往受營養(yǎng)或激素的影響，例如，奶黃僅在以缺少蛋白質(zhì)和核黃素的飼料喂飼大鼠時才引起肝癌，而且雄性大鼠較敏感，鄰位氨基偶氮甲苯則易起雌性大鼠的肝癌。
2．亞硝胺類的致癌特點
（1）致癌性強，小劑量一次給藥即可致癌；
（2）對多種動物（包括猴、豚鼠等不易誘發(fā)腫瘤的動物）的許多器官（包括食管、腦、鼻竇等不易引起癌的器官）能致癌，甚至可以通過胎盤致癌，如給懷孕大鼠以二乙基亞硝胺（Diethy lnitrosamine,DEN）可比較快地引起仔鼠的神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤；
（3）具有不同結(jié)構(gòu)的亞硝胺有明顯的器官親和性，例如二甲基亞硝胺等對稱的衍生物常引起肝癌，不對稱的亞硝胺如甲基芐基亞硝胺常誘發(fā)食管癌；在大鼠，二丁基亞硝胺能引起膀胱癌，二戊基亞硝胺能誘發(fā)肺癌，而N-甲基-N-硝基-N-1-亞硝基胍則能引起胃腸癌。
3．黃曲霉毒素的致癌特點
（1）黃曲霉毒素的毒性很強，很小劑量（1mg/kg體重）即可使狗、幼齡大鼠、火雞或小鴨致死；
（2）其致癌性也極強，最小致癌劑量比亞硝胺還要小數(shù)十倍，是已知化學(xué)致癌物中作用最強者；
（3）它能誘發(fā)多種動物（從魚到猴）的肝癌，也可引起腎、胃及結(jié)腸的腺癌，滴入氣管內(nèi)可引起肺鱗狀細胞癌；
（4）注入皮下可引起局部的肉瘤，還有報告認為，它可引起淚腺、乳腺、卵巢等其它部位的腫瘤。
4．其他
在動物實驗中早已確定：乙硫氨酸可誘發(fā)大鼠肝癌；烏拉坦（氨基甲酸乙酯，C２H５O－CONH２）、氨乙胺可引起小鼠的肺癌；一些鹵代烴如四氯化碳、氯仿等可引起大鼠或小鼠的肝癌。
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