蛋白分離純化方法

2015-07-29

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為了進(jìn)行離體(invitro)研究，必須先將目的蛋白質(zhì)從其他細(xì)胞組分中分離提純出來(lái)。這一過(guò)程通常從細(xì)胞裂解開(kāi)始（對(duì)于分泌性蛋白質(zhì)的提純則不需要裂解細(xì)胞），通過(guò)破壞細(xì)胞膜將細(xì)胞內(nèi)含物釋放到溶液中，從而獲得含有目的蛋白質(zhì)的細(xì)胞裂解液。然后通過(guò)超速離心將細(xì)胞裂解液中膜脂和膜蛋白、細(xì)胞器、核酸以及含有可溶蛋白質(zhì)的混合物。

對(duì)于天然蛋白質(zhì)，可能需要一系列的純化步驟才能獲得純度足以用于實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的蛋白質(zhì)。為了簡(jiǎn)化這一過(guò)程，通常采用基因工程的手段在目的蛋白質(zhì)上添加一些化學(xué)特性，在不改變其結(jié)構(gòu)和生物學(xué)活性的情況下使純化過(guò)程更為簡(jiǎn)單。通常是將含有特定氨基酸序列的“標(biāo)簽”連接在目的蛋白質(zhì)的N-端或C-端。例如，含有連續(xù)多個(gè)組氨酸的序列，稱為組氨酸標(biāo)簽；將含有帶組氨酸標(biāo)簽蛋白質(zhì)的裂解液流過(guò)含有鎳的親和層析柱，組氨酸就可以與鎳螯合從而結(jié)合在柱子上，而裂解液中其他蛋白質(zhì)由于沒(méi)有組氨酸標(biāo)簽而直接流出柱子，從而達(dá)到分離目的。通過(guò)基因工程（即DNA重組）改造而獲得的蛋白質(zhì)被稱為重組蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)的分離純化方法

（1）根據(jù)分子大小不同進(jìn)行分離純化。蛋白質(zhì)是一種大分子物質(zhì)，并且不同蛋白質(zhì)的分子大小不同，因此可以利用一些較簡(jiǎn)單的方法使蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì)分開(kāi)，并使蛋白質(zhì)混合物也得到分離。根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過(guò)濾等。

（2）根據(jù)溶解度不同進(jìn)行分離純化。影響蛋白質(zhì)溶解度的外部條件有很多，比如溶液的pH值、離子強(qiáng)度、介電常數(shù)和溫度等。但在同一條件下，不同的蛋白質(zhì)因其分子結(jié)構(gòu)的不同而有不同的溶解度，根據(jù)蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，適當(dāng)?shù)馗淖兺獠織l件，就可以選擇性地控制蛋白質(zhì)混合物中某一成分的溶解度，達(dá)到分離純化蛋白質(zhì)的目的。常用的方法有等電點(diǎn)沉淀和pH值調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析、有機(jī)溶劑法、雙水相萃取法、反膠團(tuán)萃取法等。

（3）根據(jù)電荷不同進(jìn)行分離純化。根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷即酸堿性質(zhì)不同分離蛋白質(zhì)的方法有電泳和離子交換層析兩類(lèi)。電泳是在外電場(chǎng)的作用下，帶電顆粒（如不處于等電點(diǎn)狀態(tài)的蛋白質(zhì)分子）將向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。聚丙烯酰胺電泳是一種以聚丙烯酰胺為介質(zhì)的區(qū)帶電泳，常用于分離蛋白質(zhì)。離子交換層析是以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。

（4）利用對(duì)配體的特異親和力進(jìn)行分離純化。親和層析是利用蛋白質(zhì)分子對(duì)其配體分子特有的識(shí)別能力建立起來(lái)的一種有效的純化方法。近年來(lái)，親和層析技術(shù)被廣泛應(yīng)用于融合蛋白的分離純化上，因?yàn)槿诤系鞍拙哂刑禺愋越Y(jié)合能力。但是在實(shí)際工作中，很難用單一方法實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的分離純化，往往要綜合幾種方法才能提純出一種蛋白質(zhì)。理想的蛋白質(zhì)分離提純方法，要求產(chǎn)品純度和總回收率越高越好，但實(shí)際上兩者難以兼顧。隨著生物分離技術(shù)的發(fā)展、新的生物分離技術(shù)的不斷出現(xiàn)，為蛋白質(zhì)的分離純化提供了許多新的方法和途徑。

蛋白純化技術(shù)（聯(lián)系更多服務(wù)項(xiàng)請(qǐng)發(fā)郵件到：marketing@medicilon.com.cn）

分類(lèi)選項(xiàng)：12-Tube Magnet 用于在1.5 ml或2 ml管中分離磁性顆粒

詳細(xì)信息：12-Tube Magnet可用于6xHis-tagged蛋白磁捕獲實(shí)驗(yàn)，或配合Ni-NTA Magnetic Agarose Beads用于純化實(shí)驗(yàn)。該磁塊由12個(gè)強(qiáng)力的NdFeB（釹鐵硼）磁盤(pán)組成。每個(gè)磁盤(pán)可吸引相鄰孔中的1.5 ml或2 ml管中的磁珠。捕獲6xHis-tagged蛋白后，磁珠被吸到管子的一端，這時(shí)可更換緩沖液。磁珠可遠(yuǎn)離磁場(chǎng)進(jìn)行重懸，實(shí)現(xiàn)徹底洗滌。

分類(lèi)選項(xiàng)：15 ml/50 ml Tube Magnet 用于分離5 x 15 ml或3 x 50 ml管中的磁性顆粒

詳細(xì)信息：15 ml/50 ml Tube Magnet是一個(gè)方便的分離裝置，適用于在15 ml或50 ml管中分離細(xì)胞、磁捕獲或與BioMag磁珠配合進(jìn)行免疫分析。磁珠在磁場(chǎng)作用下被吸到管的一端，吸引力大于20 megaoersted，在更換或倒出緩沖液時(shí)磁珠會(huì)停留在被吸引的位置。去除磁場(chǎng)后可便利的重懸磁珠。

分類(lèi)選項(xiàng)：Albumin Affinity Cartridges 用液相色譜體系去除人類(lèi)和小鼠血漿和血清樣本中的白蛋白

詳細(xì)信息：有效去除白蛋白，有助于低豐度蛋白的分析
使用固定的單克隆抗體對(duì)高豐度蛋白進(jìn)行高特異性的去除
新型設(shè)計(jì)濾筒，操作方便快速
Albumin Affinity Cartridges預(yù)裝有結(jié)合在樹(shù)脂上的固定單克隆抗體，可利用液相色譜原理，去除人類(lèi)和小鼠血漿和血清樣本中的白蛋白。有助于富集低豐度蛋白，進(jìn)行分析。
操作流程：稀釋的樣本緩慢流過(guò)濾筒，在此過(guò)程中白蛋白與樹(shù)脂上固定的單克隆抗體結(jié)合。流出液中的血漿或血清蛋白不含白蛋白，此流出液可收集以備分析之用。如果需要，可使用pH值為2的甘氨酸緩沖液將白蛋白和相關(guān)蛋白從樹(shù)脂上洗脫。
應(yīng)用：Albumin Affinity Cartridges可快速、特異性去除人類(lèi)或小鼠血漿和血清樣本中的白蛋白，有助于低豐度蛋白的分析。

分類(lèi)選項(xiàng)：Albumin/IgG Depletion Cartridge 用液相色譜體系去除人類(lèi)血清和血漿中的IgG和白蛋白

詳細(xì)信息：有效去除人類(lèi)血漿和血清樣本中的IgG和白蛋白
有助于低豐度的血漿或血清蛋白的分析
固定的單克隆抗體高特異性去除IgG和白蛋白
新型設(shè)計(jì)濾筒，操作方便快速
Albumin/IgG Depletion Cartridges預(yù)裝有結(jié)合在樹(shù)脂上的固定單克隆抗體，可利用液相色譜去除人類(lèi)血漿和血清樣本中的白蛋白和IgG。有助于富集低豐度蛋白，進(jìn)行分析。
操作流程：稀釋的樣本緩慢流過(guò)濾筒，在此過(guò)程中白蛋白和IgG與樹(shù)脂上固定的單克隆抗體結(jié)合。流出液中的血漿或血清蛋白不含白蛋白和IgG，收集流出液以備分析之用。如果需要，可使用pH值為2的甘氨酸緩沖液將白蛋白、IgG和相關(guān)蛋白從濾筒中的樹(shù)脂上洗脫。
應(yīng)用：Albumin/IgG Depletion Cartridges可快速、特異性去除人類(lèi)血漿和血清樣本中的白蛋白和IgG，有助于低豐度蛋白的分析。

分類(lèi)選項(xiàng)：Allprotect Tissue Reagent 迅速穩(wěn)定組織中的DNA、RNA和蛋白質(zhì)

詳細(xì)信息：無(wú)需液氮或干冰
立即方便地穩(wěn)定收集到的組織
可長(zhǎng)期儲(chǔ)存組織，用于后續(xù)分析
標(biāo)準(zhǔn)的樣本制備流程，用于系統(tǒng)生物學(xué)研究
Allprotect Tissue Reagent可在室溫下立即穩(wěn)定組織樣本中的DNA、RNA和蛋白質(zhì)。這樣可以穩(wěn)定DNA、RNA和蛋白質(zhì)，以保證可靠的下游分析。穩(wěn)定后的組織可在15–25°C運(yùn)輸7天，2–8°C儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月，在–20°C或–80°C可儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間。
操作流程：稀釋的樣本緩慢流過(guò)濾筒，在此過(guò)程中白蛋白和IgG與樹(shù)脂上固定的單克隆抗體結(jié)合。流出液中的血漿或血清蛋白不含白蛋白和IgG，收集流出液以備分析之用。如果需要，可使用pH值為2的甘氨酸緩沖液將白蛋白、IgG和相關(guān)蛋白從濾筒中的樹(shù)脂上洗脫。
應(yīng)用：Albumin/IgG Depletion Cartridges可快速、特異性去除人類(lèi)血漿和血清樣本中的白蛋白和IgG，有助于低豐度蛋白的分析。

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