寡核苷酸藥物，作為一類新興的生物分子治療劑，通過精準(zhǔn)靶向mRNA，展現(xiàn)出了在基因表達調(diào)控上的顯著潛力。然而，這類藥物的復(fù)雜性也給臨床前生物分析帶來了一系列挑戰(zhàn)，包括對檢測靈敏度、特異性和穩(wěn)定性的要求。其中，LC-MS/MS技術(shù)因其在定量分析和代謝物鑒定方面的卓越表現(xiàn)而備受青睞。隨著科技的不斷進步，多種創(chuàng)新的分析技術(shù)應(yīng)運而生，為寡核苷酸藥物的研究和開發(fā)提供了更為豐富的選擇。

美迪西云講堂邀請藥物代謝動力學(xué)部DMPK副主任萬咪咪，結(jié)合豐富實踐經(jīng)驗和項目經(jīng)驗，為您破解在寡核苷酸類藥物生物分析中的挑戰(zhàn)。

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1 HILIC方法的改進是否使其成為寡核苷酸生物分析的一種選擇？使用離子配對劑仍然是首選的方法嗎?

萬咪咪：與離子對反相液相色譜（IP RP HPLC）相比，HILIC方法在分離選擇性和靈敏度方面表現(xiàn)弱一些；
目前已經(jīng)有許多嘗試替代離子對系統(tǒng)的HILIC方法，但很少看到相當(dāng)?shù)姆治鲂阅?/p>

HILIC方法在寡核苷酸生物分析中具有一定的應(yīng)用潛力，尤其在需要使用不含離子對試劑的情況下。然而，離子對反相液相色譜仍然是首選的方法，因為它在分離效率和靈敏度方面表現(xiàn)更好。

2 本期云講堂中，您介紹了pH值對寡核苷酸藥物吸附損失的影響，那么在生物分析中，為何要使用高pH的流動相？這種高pH的流動相的分析有哪些優(yōu)勢和局限性？

萬咪咪：在生物分析中，使用高pH值的流動相具有多個優(yōu)勢。首先，高pH環(huán)境能夠顯著提高寡核苷酸的穩(wěn)定性。DNA和RNA在中性至堿性條件下更為穩(wěn)定，因此高pH條件下有助于保護寡核苷酸的完整性和穩(wěn)定性。

從LC-MS分析的角度來看，高pH條件下寡核苷酸保留能力增加，這有助于提升分離效果和分辨率。此外，高pH流動相還能減少非特異性吸附，從而提高方法的回收率、準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。
然而，高pH值的流動相也存在一些局限性。特別是對柱材料的穩(wěn)定性做成一定影響，尤其是硅膠柱材料，這將會影響色譜柱的使用壽命和維護成本。

3 寡聚核苷酸類藥物生物分析平臺的選擇有哪些？

萬咪咪： 隨著寡核苷酸結(jié)構(gòu)多樣性的增加以及樣品制備和分析技術(shù)的進步，其生物分析也在不斷的發(fā)展。對于寡核苷酸生物分析的選擇仍然是基于適合目的原則，并應(yīng)根據(jù)具體情況進行評價。例如，在進行微量樣本分析時，如果LC-MS不能夠滿足分析需求，研究人員可能會考慮采用HELISA或qPCR作為分析方法。然而，如果已知HELISA或qPCR會受到某些因素的影響，那么在條件允許的情況下，LC-MS由于其更高的準(zhǔn)確性，可能會成為首選。

4 請問食蟹猴鞘內(nèi)注射給藥，是進行腰椎插管給藥嗎？腦脊液的采集是如何采集，在什么位置采集？有多少小核酸鞘內(nèi)注射的研究經(jīng)驗？

萬咪咪：食蟹猴鞘內(nèi)注射給藥注射位點在L3/L4或L4/L5位置進行腰椎間穿刺，通過枕大池連續(xù)腦脊液收集。美迪西科研團隊具有豐富的項目經(jīng)驗，可以做猴子，大鼠鞘內(nèi)注射，并且能夠提供定制化的解決方案，滿足客戶需求。

如果您對于新藥研發(fā)臨床前研究過程中有一些困惑或者想要深入了解的專題內(nèi)容，可以留下您的問題和建議，美迪西希望和您一起，探索新藥研發(fā)的奇妙世界。