免疫細(xì)胞一般分為T細(xì)胞與B細(xì)胞，B細(xì)胞會分泌各種抗體來促使人體抵御各種外來的侵入。布魯頓酪氨酸激酶（BTK）主要在B細(xì)胞和髓細(xì)胞中表達(dá)，分布在淋巴系統(tǒng)、造血及血液系統(tǒng)，但在T細(xì)胞和漿細(xì)胞中也發(fā)現(xiàn)了較低水平的BTK表達(dá)^[1]。BTK是非受體蛋白酪氨酸激酶Tec家族的成員，是B細(xì)胞抗原受體（BCR）信號通路中的關(guān)鍵激酶，能夠調(diào)節(jié)正常B細(xì)胞的增殖、分化與凋亡，這也充分說明了BTK在B淋巴細(xì)胞的生成過程中起著不可替代的作用，是治療血液腫瘤的理想靶點(diǎn)。

BTK的結(jié)構(gòu)概括和作用機(jī)制

人BTK基因的染色體編碼了659個(gè)氨基酸。BTK基因包括了PH結(jié)構(gòu)域、TH結(jié)構(gòu)域、SH3結(jié)構(gòu)域、SH2結(jié)構(gòu)域和SH1結(jié)構(gòu)域。其中PH結(jié)構(gòu)域由大約120個(gè)氨基酸組成，包含轉(zhuǎn)錄因子BAP-135/TFH-I以及活性下調(diào)因子PIN1、IBTK的結(jié)合位點(diǎn)，同時(shí)也負(fù)責(zé)介導(dǎo)BTK與第2信使磷脂酰肌醇三磷酸（PIP3）的作用。TH結(jié)構(gòu)域由大約80個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，由BTKmotif 和富含脯氨酸區(qū)域兩部分組成。SH3結(jié)構(gòu)域能特異識別TH結(jié)構(gòu)域中富含脯氨酸片段，誘發(fā)分子內(nèi)折疊。SH1結(jié)構(gòu)域包含活化環(huán)、ATP結(jié)合位點(diǎn)、催化器以及變構(gòu)抑制片段。BTK的活化（磷酸化）最初發(fā)生在SH1結(jié)構(gòu)域中的活化環(huán)中，進(jìn)一步的活化發(fā)生在包含主要自磷酸化位點(diǎn)的SH2及SH3結(jié)構(gòu)域中。SH2結(jié)構(gòu)域的功能是特異性識別酪氨酸殘基的磷酸化狀態(tài)，從而使包含SH2結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)可以定位到其它蛋白的磷酸化酪氨酸位點(diǎn)上。

BTK的下游受體包括生長因子、B細(xì)胞抗原、趨化因子及非特異免疫受體等，因此BTK的活化能引發(fā)諸如：細(xì)胞增殖、存活、分化、血管新生、抗原表達(dá)和細(xì)胞因子合成等多種細(xì)胞過程。而BTK活化的重點(diǎn)在于BTK遷移到細(xì)胞膜上，當(dāng)細(xì)胞膜上的一些受體接收到相應(yīng)配體的刺激后，活化的受體會募集并磷酸化胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)激酶PI3K，磷酸化的PI3K隨后將膜上的PIP2轉(zhuǎn)化為第2信使PIP3。PIP3結(jié)合到BTK的PH結(jié)構(gòu)域，BTK隨后會被募集到細(xì)胞膜，隨后Tyr-551殘基被Syk和Lyn激酶磷酸化。BTK接著在Tyr-223殘基進(jìn)行自磷酸化反應(yīng)從而具備生理活性。

BTK激酶參與體內(nèi)多種重要信號的轉(zhuǎn)導(dǎo),其活化對多個(gè)細(xì)胞過程具有重要影響。

• BTK障礙可以導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫缺陷，從而影響B(tài)細(xì)胞的發(fā)育成熟。

• 機(jī)體發(fā)生免疫應(yīng)答時(shí)，BTK通過介導(dǎo)B細(xì)胞信號激活，誘導(dǎo)基因表達(dá)，從而調(diào)控B細(xì)胞的增殖與凋亡。

• 正常人單核細(xì)胞中過表達(dá)BTK，將會促進(jìn)TNF-α產(chǎn)生，而BTK基因異常者，促TNF-α產(chǎn)生能力下降，從而使BTK活化誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生促炎因子。

綜合BTK的結(jié)構(gòu)與功活化機(jī)制，使得BTK成為一個(gè)具有廣泛目標(biāo)疾病的靶點(diǎn)，如B細(xì)胞惡性腫瘤、哮喘、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡等^[2]。

BTK抑制劑的發(fā)展進(jìn)程

BTK是B細(xì)胞抗原受體和細(xì)胞因子受體通路的信號傳導(dǎo)分子，可通過B細(xì)胞表面受體的激活，使B細(xì)胞的運(yùn)輸、趨化和黏附通路的信號發(fā)揮作用，對于細(xì)胞的增殖、分化和凋亡具有十分重要的作用。

Ibrutinib是小分子BTK抑制藥，在2013 年底獲得美國FDA 的批準(zhǔn)，通過與BTK活性位點(diǎn)中的半胱氨酸殘基形成共價(jià)鍵，從而抑制BTK酶的活性。Ibrutinib目前的適應(yīng)癥包括慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）、小淋巴細(xì)胞白血?。⊿LL）,17P缺失慢性淋巴CLL/SLL套細(xì)胞淋巴瘤，華氏巨球蛋白血癥。

2014年 10 月，Ibrutinib獲得歐盟EMA 的上市批準(zhǔn)；2015 年獲得日本PMDA 的批準(zhǔn)，治療復(fù)發(fā)或難治性的 CLL；目前還未在中國獲批上市。

研究發(fā)現(xiàn)BTK激酶具有潛在的食道癌治療效果，BTK/ERBB2激酶抑制劑中Ibrutinib可顯著抑制食道癌模型的疾病進(jìn)展，目前Ibrutinib治療MYC和(或)ERBB2過表達(dá)的中晚期食管癌的II期臨床研究正在進(jìn)行中。另外，在MYC以及ERBB2過表達(dá)細(xì)胞系中，Ibrutinib可以降低ERK介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制cMYC磷酸化，減低MYC蛋白水平，引起G1細(xì)胞周期阻滯和凋亡。

由于Imbruvica尚且具有off-target和突變導(dǎo)致的耐藥性等弱點(diǎn)，II代BTK抑制劑應(yīng)運(yùn)而生，目前首個(gè)二代BTK抑制劑Acalabrutinib于2017年11月2日被FDA批準(zhǔn)上市，用于治療治療罹患套細(xì)胞淋巴瘤且曾接受過至少一次治療的成人患者。與Ibrutinib相比，Acalabrutinib臨床前及臨床I期和II期的數(shù)據(jù)顯示其能夠選擇性地阻斷BTK通路而不會破壞其他保持血小板和免疫功能的關(guān)鍵分子通路。因此避免或減少了與癌癥治療相關(guān)的某些不良反應(yīng),具有更好的安全性。

BTK小分子抑制劑對于治療血液惡性腫瘤的自身免疫失調(diào)疾病具有良好前景，除了已經(jīng)上市的Ibrutinib和Acalabrutinib外，還有多個(gè)在研的小分子抑制劑也已經(jīng)進(jìn)入臨床前或者是臨床研究階段。

在上述BTK小分子抑制劑中，GDC-0834是一種高選擇性的BTK可逆抑制劑，對抑制BCR或CD40依賴型B細(xì)胞的活化增殖有良好活性，目前被視為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的潛在治療藥物。

RN-486在酶活性測試中顯示出了較高的活性和特異性，在抗風(fēng)濕活性中顯示出良好的抗炎和緩解疾病的作用。

CGI-1764是一個(gè)ATP競爭性小分子BTK抑制劑，能夠在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中明顯降低小鼠關(guān)節(jié)中的細(xì)胞因子水平和免疫抗體水平。

CC-292是一種丙烯酰胺類BTK抑制劑，是有可能治療多種B細(xì)胞增殖失調(diào)癥的潛在藥物。

BTK抑制劑的研究新進(jìn)程

Wataru Kawahata等人^[3]通過sca?old-hopping選取了一系列新型氨基三嗪為BTK的高選擇性抑制劑。隨后在SAR研究中使用了活化和未活化的BTK蛋白，從而發(fā)現(xiàn)了一種高度選擇性的BTK抑制劑4b。4b在體內(nèi)模型中療效顯著，ADME和安全性良好，已進(jìn)入臨床前研究。

BTK抑制劑可以治療多種疾病，如B細(xì)胞惡性腫瘤、哮喘和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，是一種很有前途的藥物靶點(diǎn)；目前針對BTK的各種候選藥物正在臨床研究中，預(yù)計(jì)會有更多的有效有選擇性的藥物問世，為患者提供新的治療方案。

參考文獻(xiàn)：

1,Liu, Y. Zhou, G. Zhang, B. Liu, Y. Bruton’s tyrosine kinase: structure andfunctions, expression and mutations. Gene Technol. 2013, 2, 106.

2,Hendriks, R. W. Yuvaraj, S. Kil, L. P. Targeting Bruton’s tyrosine kinase in Bcell malignancies. Nat. Rev. Cancer 2014, 14, 219?232.

3,Wataru Kawahata , Tokiko Asami, Takao Kiyoi, Takayuki Irie, Haruka Taniguchi,Yuko Asamitsu, Tomoko Inoue, Takahiro Miyake, and Masaaki Sawa. Design andSynthesis of Novel Amino-triazine Analogues as Selective Bruton’s TyrosineKinase Inhibitors for Treatment of Rheumatoid Arthritis. J. Med. Chem. 2018, 61,19, 8917-8933.