美迪西細胞毒性實驗服務

2016-03-23

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上海美迪西的生物部在體外生物學領域有豐富廣泛的經驗，通過酶水平測定、細胞水平測定、細胞生物學、生物化學、體外同位素測定、穩(wěn)定細胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術等，提供一套完整的生物學服務。

細胞毒性檢測

美迪西細胞水平測定服務項目

細胞毒性分析
細胞凋亡檢測分析
細胞遷移分析
細胞侵襲分析
HTRF 細胞水平檢測分析
免疫染色分析
免疫熒光分析(96/384 孔板)
報告基因分析(綠色熒光蛋白/熒光素酶)
放射性配體受體結合試驗
細胞攝取分析
基因敲除分析
MicroRNA過表達分析
MicroRNA 敲除分析
有關腺病毒/逆轉錄病毒/慢病毒載體的應用分析
美迪西建立了100多種細胞株用于細胞水平測定。
乳腺癌細胞
大腸癌細胞
白血病細胞
肝癌細胞
腎癌細胞
肺癌細胞
黑素瘤細胞
卵巢癌細胞
胰腺細胞
胃癌細胞

了解細胞毒性服務詳情

細胞毒性是化學物質(藥物)作用于細胞基本結構和/或生理過程，如細胞膜或細胞骨架結構，細胞的新陳代謝過程，細胞組分或產物的合成、降解或釋放，離子調控及細胞分裂等過程，導致細胞存活、增殖和/或功能的紊亂，所引發(fā)的不良反應。

細胞毒性按作用機制可分3種類型:
①基本細胞毒性，涉及一種或多種上述結構或功能的改變，作用于所有類型的細胞;
②選擇細胞毒性，存在于某些分化細胞上，主要通過化學物質的生物轉化，與特殊受體結合或特殊的攝入機制所引發(fā)；
③細胞特殊功能毒性，對細胞結構和功能損傷輕微，但對整個機體損傷非常嚴重。

細胞毒性實驗方案的確立在確定MTT法作為細胞毒性實驗的方法之后，我們對實驗中可能涉及的各個參數(shù)進行了摸索和優(yōu)化。最初，由于一切都是未知，因此常常幾個參數(shù)一起調整，使得各個參數(shù)對結果的影響不是很清楚，走了一些彎路。后期逐漸摸清了參數(shù)對結果影響的權重，實驗方案逐步確立。
考慮的實驗參數(shù)有:細胞批次、細胞密度、孵育時間、加藥次數(shù)、MTT 量、MTT 孵育時間、DMSO溶解時間(振蕩時間)等。

細胞毒性實驗方法穩(wěn)定后的部分數(shù)據(jù)在細胞毒性實驗方案穩(wěn)定之后，在各孔吸光度的標準差、變異系數(shù)和各孔抑制率的標準差都可以控制在很低的水平，表明該實驗方案是穩(wěn)定的，具有良好的重現(xiàn)性。

細胞毒性實驗質量評價指標

對細胞毒性進行質量評價的指標初步定為以下七條：
1、OD平均值:反映復孔間OD值的平均水平，OD值越大，細胞數(shù)越多。
2、復孔OD值間的標準差(STDEV):反映各復孔OD值之間的離散情況。標準差越大，說明復孔間不平行性越大，操作誤差越大。
3、OD值間的變異系數(shù)(CV):也是反映復孔間OD值離散情況的指標。由于OD值間的標準差(STDEV)的單位和OD的單位是一致的，不能體現(xiàn)離散的權重，因此引入變異系數(shù)(CV)。這一指標以百分比的形式表現(xiàn)OD 值的離散情況，形象、直觀。

4、存活率(%Viability):計算各藥物濃度下細胞的存活率可以反映細胞存活情況，該值越大，說明藥物的細胞毒性作用越小。

5、存活率的標準差(%STDEV):該值反映如以每個復孔均作為單獨的實驗,則同批的復孔可以看作數(shù)批實驗，此時存活率的分布情況。該指標越大，說明復孔間越不平行。

6、存活率的變異系數(shù)(%CV):該指標反映各復孔間存活率的離散情況，該值越大，說明說明每一列細胞孔(即一系列稀釋單孔)間不平行性越大。

7、半數(shù)致細胞毒性濃度:指對半數(shù)細胞產生毒性作用所需濃度。該指標可用來反映實驗系統(tǒng)是否正常工作及評價未知藥物對細胞的毒性。