服務(wù)項(xiàng)目背景

單克隆抗體（McAb）使用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)將免疫動(dòng)物的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞，通過(guò)HAT篩選、ELISA抗體檢測(cè)、亞克隆，選擇出具有分泌抗體功能又可無(wú)限繁殖的雜交瘤細(xì)胞，生產(chǎn)單克隆抗體。單抗的優(yōu)點(diǎn)是特異性、均一性、高效性和無(wú)限供應(yīng)性。在免疫學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和臨床醫(yī)學(xué)上，包括對(duì)疾病(癌癥等)的診斷、預(yù)防和治療等方面，均顯示出巨大的生命力。

單抗的最大優(yōu)勢(shì)是它的特異性、均一性、高效性和無(wú)限供應(yīng)性。在免疫學(xué)、醫(yī)學(xué)、生物學(xué)等領(lǐng)域的基礎(chǔ)研究和臨床醫(yī)學(xué)上，包括對(duì)疾病(包括癌癥)的診斷、預(yù)防和治療等方面，均顯示出巨大的生命力。
 
單克隆抗體制備服務(wù)為客戶提供完善的制備選項(xiàng)，不僅為您制備單克隆抗體株，也可為您長(zhǎng)期提供大量高純度的抗體，方便客戶根據(jù)自己的需求選擇最適合的服務(wù)生產(chǎn)線。本項(xiàng)技術(shù)服務(wù)主要包括：
- Balb/c純系小鼠免疫；
- 脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞的融合；
- 抗體產(chǎn)生細(xì)胞的ELISA篩選；
- 抗體產(chǎn)生細(xì)胞的亞克隆與擴(kuò)增；

- 指定細(xì)胞克隆的體外培養(yǎng)或腹水瘤接種法生產(chǎn)單克隆抗體。

單克隆抗體技術(shù)流程

1、抗原表位設(shè)計(jì)：使用特有分析軟件，以在線分析方法為輔助，綜合蛋白三維結(jié)構(gòu)、活性位點(diǎn)、親水性等因素，多參數(shù)預(yù)測(cè)抗原表位，大大提高了抗原表位的可靠性，為后續(xù)的抗體制備提供了有力保證。
2、 多肽合成，包括：標(biāo)準(zhǔn)肽合成、肽修飾、不同純度多肽處理、抗原多肽及其與蛋白的交聯(lián)等。
3、  重組蛋白抗原制備

（1）重組質(zhì)粒構(gòu)建
（2）質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
（3）誘導(dǎo)表達(dá)
（4）蛋白純化
（5）蛋白鑒定

所得到的重組蛋白，具有較高的純度和活性，可用于免疫動(dòng)物以獲得單克隆抗體。
4、 雜交瘤制備

（1）免疫動(dòng)物：免疫動(dòng)物的選擇根據(jù)骨髓瘤細(xì)胞株的來(lái)源而定，國(guó)內(nèi)目前常用的骨髓瘤細(xì)胞均來(lái)自Balb/c小鼠。免疫原可為：可 溶性抗原、顆粒性（細(xì)胞）抗原。
（2）骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)。
（3）飼養(yǎng)細(xì)胞的制備。
（4）細(xì)胞融合。
（5）HAT篩選。

5、 篩選分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞 
一般常用的有：免疫熒光、放射免疫（RIA）、組織化學(xué)法和酶聯(lián)免疫分析（ELISA）法等，以ELISA方法最為常用。
6、 雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)
經(jīng)檢測(cè)的雜交細(xì)胞雖然分泌抗體，但它可能是一個(gè)雜交細(xì)胞，也可能是多個(gè)雜交細(xì)胞的后代所分泌的抗體，因此必須進(jìn)行克隆化培養(yǎng)，以獲得得一個(gè)既有克隆原性又分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞株。
7、 單克隆抗體的大量制備
雜交瘤細(xì)胞建成之后，需要制備大量抗體以備使用。把雜交瘤細(xì)胞接種到小鼠腹腔內(nèi)，在雜交瘤生長(zhǎng)的同時(shí)滲出大量腹水，腹水含有抗體，每毫升可達(dá)到毫克水平，是目前廣泛采用的方法。
8、 抗體純化
通常講單克隆抗體已經(jīng)是很純的，在實(shí)驗(yàn)研究中可以使用，但由于它的來(lái)源不同，可能會(huì)含有培養(yǎng)液的成份或鼠腹腔液等無(wú)關(guān)的蛋白質(zhì)影響純度，因而需用硫酸銨沉 淀法、辛酸-硫酸胺法、DEAE-纖維素法或親和層析等方法進(jìn)行純化。本公司主要采用親和層析方法，為客戶獲得高純度的單克隆抗體。
9、 抗體鑒定

雜交瘤細(xì)胞建株后，還需對(duì)其所分泌的單克隆抗體的理化性質(zhì)及對(duì)抗原的特異性等進(jìn)行鑒定，通常需進(jìn)行以下工作：抗原本身的IgG亞類測(cè)定；所抗抗原分子量的測(cè)定；Western blot鑒定；ELISA效價(jià)鑒定等。

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