SPR技術(shù)基于物理光學(xué)現(xiàn)象，能夠精準(zhǔn)地檢測(cè)分子間的相互作用。以Biacore為代表的SPR技術(shù)，不僅在抗體藥物的研發(fā)、生產(chǎn)以及上市申報(bào)過(guò)程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用，還被正式收錄于2020版《中國(guó)藥典》，成為行業(yè)內(nèi)的權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)。

此外，SPR技術(shù)的應(yīng)用范圍極為廣泛。它不僅適用于抗體藥物的研究，還在中藥、化學(xué)合成藥物小分子靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)與相互作用研究中大放異彩?？梢哉f(shuō)，SPR技術(shù)為藥物研發(fā)的各個(gè)環(huán)節(jié)提供了堅(jiān)實(shí)的技術(shù)保障，助力科研人員在探索藥物奧秘的道路上不斷前行。

美迪西邀請(qǐng)生物部酶學(xué)項(xiàng)目經(jīng)理董海輝老師為您解答SPR實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)中常見(jiàn)的問(wèn)題。點(diǎn)擊鏈接：http://www.ccttf.com/video/spr-technology.shtml?sessionid=1533986035，回顧SPR技術(shù)探索與避坑實(shí)戰(zhàn)指南直播!

01 請(qǐng)問(wèn)SPR做kinetics 1:1 binding擬合kd 超限導(dǎo)致擬合有誤差，affinity擬合不可信，這樣的數(shù)據(jù)如何擬合和分析?

董海輝：可以從以下幾方面優(yōu)化：一是優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，降低分析物濃度至幾十RU，提高流速，延長(zhǎng)解離時(shí)間，以提高信號(hào)捕捉的準(zhǔn)確性；二是優(yōu)化數(shù)據(jù)處理與分析，選擇合適的模型（如雙位點(diǎn)模型或考慮質(zhì)量傳遞影響的模型），對(duì)整個(gè)數(shù)據(jù)集進(jìn)行全局?jǐn)M合，并仔細(xì)校正基線和扣除背景信號(hào)，減少誤差。

02 請(qǐng)問(wèn)做多肽和蛋白結(jié)合時(shí)，氨基偶聯(lián)法固定蛋白，結(jié)果發(fā)現(xiàn)baseline一直在上升，有什么辦法解決呢？

董海輝：若發(fā)現(xiàn)基線一直在上升，可能是由于緩沖液或樣品中存在非特異性吸附導(dǎo)致的?？梢試L試在緩沖液中添加適量的BSA（如1%），或加入適量的表面活性劑（如吐溫20），增加洗滌步驟以減少非特異性吸附；或者調(diào)整流速，適當(dāng)提高流速，有助于減少蛋白在芯片表面的非特異性吸附。

03 想問(wèn)下最后一個(gè)案例，使用捕獲法后，得到的響應(yīng)值在30RU左右，比預(yù)期高，有沒(méi)有可能是結(jié)合位點(diǎn)不止一個(gè)？

董海輝：一般來(lái)說(shuō)，抗體捕獲法后得到的響應(yīng)值出乎意料的高，可能有多種原因。結(jié)合位點(diǎn)不止一個(gè)確實(shí)可能導(dǎo)致較高的響應(yīng)值，但還有其他因素也可能導(dǎo)致這種情況。例如，抗原結(jié)合過(guò)程中可能存在非特異性吸附，或者實(shí)驗(yàn)條件（如緩沖液成分、流速等）不理想。此外，抗體本身的親和力過(guò)高，或者抗原濃度過(guò)高也可能導(dǎo)致響應(yīng)值偏高。

04 共價(jià)非可逆化合物可以用這個(gè)方法測(cè)親和力嗎？

董海輝：是可以使用的，例如，使用單循環(huán)方法，通過(guò)在多個(gè)不同濃度下進(jìn)行單次注射，觀察結(jié)合曲線的飽和情況，從而間接推斷親和力。需要注意的是，共價(jià)非可逆化合物的親和力測(cè)量結(jié)果可能受到實(shí)驗(yàn)條件（如濃度、溫度、緩沖液組成等）的顯著影響，因此在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)和解讀結(jié)果時(shí)需要特別小心。

05 如何判斷是否存在非特異性吸附呢？

董海輝：判斷是否存在非特異性吸附，可查看數(shù)據(jù)分析中的“Binding to reference”質(zhì)控參數(shù)。若該參數(shù)值超過(guò)活性通道扣減參比通道信號(hào)值的20%，則可能表明存在顯著的非特異性吸附。為減少非特異性吸附，可優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，如在緩沖液中加入適量BSA或表面活性劑（如吐溫20），控制固定量，延長(zhǎng)再生時(shí)間，以及確?？贵w或抗原具有高特異性。

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