美迪西動物腫瘤模型

腫瘤動物模型可分為三類：

自發(fā)性腫瘤動物模型

誘發(fā)性腫瘤動物模型

移植性腫瘤動物模型

1、自發(fā)性腫瘤動物模型：未經(jīng)人為處理；自然發(fā)生；

自發(fā)性腫瘤的總體評價——動物自發(fā)性腫瘤的病因往往是由動物的遺傳特性決定的,與人癌的病因有較大距離。各動物腫瘤生長速度差異較大, 很難在限定時間內(nèi)獲得大量生長均勻的荷瘤動物(tumor-bearing animals)。因此，自發(fā)性腫瘤動物模型很少在抗腫瘤藥物的常規(guī)篩選中廣泛應(yīng)用。

2、誘發(fā)性腫瘤動物模型：在實驗條件下; 使用致癌物(carcinogens); 誘發(fā)動物發(fā)生腫瘤

(animal model of induced tumor)指使用致癌因素(carcinogens)在實驗條件下誘發(fā)動物發(fā)生腫瘤的動物模型，它是進行實驗?zāi)[瘤學(xué)研究的常用方法。常用于驗證可疑致癌因素的作用，也越來越多地應(yīng)用于腫瘤發(fā)生機理的研究及防治效果的觀察上，在腫瘤病因?qū)W、遺傳學(xué)、生物學(xué)等方面的研究中有重要地位。由于誘發(fā)因素和條件可人為控制，誘發(fā)率遠高于自然發(fā)病率，故在腫瘤實驗研究中優(yōu)于自發(fā)瘤。

用于誘發(fā)實驗性腫瘤的動物種類很多，它們因種族不同而對相同致癌因素有不同的反應(yīng)性。常用的動物以哺乳動物為主，其中嚙齒類動物的使用最多，應(yīng)用最廣，包括各種大鼠、小鼠、豚鼠等。

誘發(fā)性腫瘤模型的原理是利用外源性致癌因素引起細胞遺傳特性異常而呈現(xiàn)出異常生長和高增殖活性，形成腫瘤。致癌因素主要有化學(xué)性、物理性及生物性致癌物，而化學(xué)性致癌物(chemical carcinogens)最常見，已確知的多達一千余種，用于誘發(fā)實驗性腫瘤的種類亦很多，如苯并芘、甲基膽蒽、聯(lián)苯胺、亞硝胺類、黃曲霉毒素類。各種致癌物的致癌強度、致癌譜等特性相差較大，同一種致癌物經(jīng)不同途徑給藥所致腫瘤部位或類型可有很大差異。有些化學(xué)性致癌物具有明顯的親器官或組織特性。因此，實驗工作中應(yīng)根據(jù)需要選用適當(dāng)致癌物和致癌途徑，并確定其他影響因素或?qū)嶒灄l件。

基本原理：利用外源性致癌物引起細胞遺傳特性改變，從而出現(xiàn)異常生長和高增殖活性細胞,形成腫瘤。外源性致癌物主要有化學(xué)性、物理性(如放射性物質(zhì))及生物性(如誘發(fā)動物腫瘤的病毒),其中以化學(xué)性致癌物最為常用。

①誘發(fā)性腫瘤動物模型的基本方法：實驗時,必需注意選擇合適的致癌方法、動物種系、致癌物及其溶劑、給予劑量、途徑以及觀察時間等。致癌物的劑量應(yīng)能保證動物的存活率較高、誘發(fā)期較短和誘發(fā)腫瘤頻率較高。

常用的致癌物給予方法和途徑：

a.涂抹法: 涂抹在背部及耳部皮膚,主要用于誘發(fā)皮膚腫瘤。

b.經(jīng)口給藥法：通過飲水、飼料或灌喂動物。常用于食道癌、胃癌及大腸癌等。

c.注射法：致癌物制成溶液,經(jīng)皮下、肌內(nèi)、靜脈或體腔等途徑注入體內(nèi),本法較常用。

d.氣管注入法：常用于誘發(fā)肺癌。

e.穿線法：將致癌物置于無菌試管內(nèi),加熱使之液化,吸附于預(yù)制的線結(jié)上,再將此線結(jié)穿入靶組織而誘發(fā)腫瘤。

f.埋藏法：包埋于皮下或其他組織內(nèi)。

②誘發(fā)性腫瘤模型的動物和致癌物

動物：大鼠，小鼠，犬等

致癌物：多環(huán)碳氫類、亞硝胺類、偶氮類、黃曲霉毒素（飼料中含0.001~0.015ppm黃曲霉毒素B1, 喂養(yǎng)6個月,誘發(fā)大鼠肝癌）。

誘發(fā)性腫瘤模型的總體評價：約80%人癌是由環(huán)境因素引起的,誘發(fā)性腫瘤的病因與人癌的情況近似,且均經(jīng)過較長演變過程而成瘤。動物誘發(fā)性腫瘤是比較類似于人類腫瘤的動物模型。然而,人癌的發(fā)生原因十分復(fù)雜,往往并非由已知的動物致癌物所引起。另外,動物誘發(fā)性腫瘤的組織病理類型、發(fā)生發(fā)展過程也不一定與人癌完全一致。

本模型的最大困難是誘癌時間長、成癌率常達不到100%, 而且動物之間腫瘤發(fā)生時間、發(fā)展速度的個體差異很大, 難以將未治療的動物作為治療動物的對照。

3、移植性腫瘤動物模型

移植性腫瘤動物模型是指將動物或人體腫瘤移植到同種或異種動物體內(nèi)連續(xù)傳代而形成的腫瘤。

該實驗法是抗腫瘤藥物篩選最常用的體內(nèi)方法，具有重要作用。目前臨床上常用的抗腫瘤藥大多是首先經(jīng)該實驗法而被發(fā)現(xiàn)的。

一般給予試驗藥7~10d,在第8~11d可解剖動物獲得結(jié)果。通過一些指標的觀察,可以判斷試驗藥是否有具有抑制腫瘤生長的作用。這是任何體外試驗所不能替代的,其結(jié)果可為抗癌藥物療效提供重要依據(jù)。

它比前述的自發(fā)性和誘發(fā)性動物腫瘤更易實施。 現(xiàn)有移植性腫瘤接種成功率可達100%, 可在同一時間內(nèi)獲得大量(數(shù)十至百余只動物)、生長相當(dāng)均勻的腫瘤。

①、動物的選擇

移植性腫瘤常用的動物為小鼠、大鼠和地鼠。研究藥物的抗腫瘤作用可選擇三種或三種以上小鼠、大鼠的移植性腫瘤進行實驗治療；抗腫瘤藥物篩選時，每批動物的來源應(yīng)一致；

根據(jù)瘤株的特點選用近交系、遠交系或F1動物；雌雄性動物均可應(yīng)用(乳腺癌等必須用雌性動物)。

▲每批實驗只用同一性別動物。

▲小鼠體重18~22g，大鼠體重50~70g

▲每組至少10只動物，裸鼠可用5~10只。

②、腫瘤細胞的選擇

復(fù)制移植性腫瘤模型需要使用腫瘤細胞株(瘤株，tumor strain)或細胞系(cell line)。

細胞株(cell strain)是指通過選擇法或克隆法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊遺傳、生化性質(zhì)或特異標記的細胞群。

瘤株的組織學(xué)類型和生長特征趨于穩(wěn)定，并能在同系、同種或異種動物體內(nèi)移植并連續(xù)傳代。

生長特征，包括接種成活率、生長速度、自動消退率、宿主壽命與宿主反應(yīng)等。

細胞系：原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。

③、接種方法

(一)一般要求

整個操作應(yīng)在無菌條件下進行，可在無菌室和超凈工作臺內(nèi)操作。動物處死后消毒皮膚，對每個實體瘤應(yīng)分別使用滅菌的外科器械切取，對腹水瘤則應(yīng)分別用滅菌的注射器抽吸。

瘤塊污染常是接種失敗的主要原因，應(yīng)特別注意!!在高溫季節(jié)操作時，可在盛有瘤源的器皿周圍放置冰塊直接降溫。

常用接種部位：

實體瘤_____腋窩皮下

肌肉接種___大腿肌肉

腹水型腫瘤__腹腔

④、腫瘤細胞的凍存與復(fù)蘇

為了使腫瘤細胞能得以長期使用，防止退化或變異，保存不同代細胞的特征，對腫瘤細胞或瘤株進行冷凍保存是很必要的。一般在液氮中凍存1~2年，細胞存活率可達80%~90%。