哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng),具備蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，使其蛋白更接近天然蛋白，從而獲得與天然蛋白相同的生物活性。因此使得哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)在重組蛋白藥物，特別是治療性重組單抗藥物的研發(fā)和生產(chǎn)中有最為廣泛的應(yīng)用。

美迪西生物醫(yī)藥所提供的哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)系統(tǒng)基于無血清培養(yǎng)體系提供基因表達(dá)優(yōu)化,瞬時(shí)表達(dá),穩(wěn)定表達(dá)及抗體生產(chǎn)等多種真核蛋白服務(wù)項(xiàng)目。哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)服務(wù)詳情

美迪西科研人員建立了成熟的哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)系統(tǒng)及純化服務(wù)平臺(tái)，提供哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)與純化服務(wù)。擁有CHO、HEK293、BHK、 Vero等多種表達(dá)系統(tǒng)。

• 服務(wù)項(xiàng)目

• 貼壁及懸浮培養(yǎng)

• 瞬轉(zhuǎn)表達(dá)篩選

• 穩(wěn)定細(xì)胞系建

Rabbit IgG expressed in transient transfected 293 cells

    Note: the condition medium was run in 10%SDS-PAGE gel and stained with coomassie blue（備注:）

    哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的爭(zhēng)取折疊，提供復(fù)雜的N型糖基化等多種翻譯后加工功能，因而表達(dá)產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面最接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)的分類

根據(jù)目的蛋白表達(dá)的時(shí)空差異，可將表達(dá)系統(tǒng)分為瞬時(shí)、穩(wěn)定和誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)。
瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)是指宿主細(xì)胞在導(dǎo)入表達(dá)載體后不經(jīng)選擇培養(yǎng)，載體DNA隨細(xì)胞分裂而逐漸丟失，目的蛋白的表達(dá)時(shí)限短暫；瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)潔，實(shí)驗(yàn)周期短。大規(guī)模的瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)是近年來的一個(gè)研究熱點(diǎn)。已有報(bào)道能放大到100L反應(yīng)器中生產(chǎn)重組蛋白，產(chǎn)量（分泌型蛋白）可達(dá)1~10mg/L。不過該方法技術(shù)條件要求高，如質(zhì)粒的純度、轉(zhuǎn)染的效率等。

穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)是指載體進(jìn)入宿主細(xì)胞并經(jīng)選擇培養(yǎng)，載體DNA穩(wěn)定存在于細(xì)胞內(nèi)，目的蛋白的表達(dá)持久、穩(wěn)定。由于需抗性選擇甚至加壓擴(kuò)增等步驟，穩(wěn)定表達(dá)相對(duì)耗時(shí)耗力。
誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)是指目的基因的轉(zhuǎn)錄受外源小分子誘導(dǎo)后才得以開放。早期實(shí)驗(yàn)常使用糖皮質(zhì)激素、重金屬離子等誘導(dǎo)體系來調(diào)控基因表達(dá)，但存在特異性低和毒性高等諸多缺點(diǎn)；

表達(dá)系統(tǒng)的選擇

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中，重組蛋白的表達(dá)水平與許多因素相關(guān)，如轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件、RNA剪接過程、mRNA穩(wěn)定性、基因在染色體上的整合位點(diǎn)、重組蛋白對(duì)細(xì)胞的毒性作用以及宿主細(xì)胞的遺傳特性等。選定表達(dá)系統(tǒng)之后，還需考慮表達(dá)載體與宿主細(xì)胞的合理搭配問題。因此如果需獲得一個(gè)基因的高表達(dá)。最好多試用幾種不同的載體及宿主細(xì)胞。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)應(yīng)用領(lǐng)域

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)已成為多種基因工程藥物的生產(chǎn)平臺(tái)。

    哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)在新基因的發(fā)現(xiàn)、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能研究中起了極為重要的作用。

    一、穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系的篩選

        1、構(gòu)建目的基因的表達(dá)載體

        2、確定受體細(xì)胞

        3、確定篩選方法（抗生素的使用濃度）

        4、轉(zhuǎn)染后48小時(shí)，串帶鋪板（1:100），加篩選藥物

        5、3-4d換液一次，直至存活細(xì)胞長(zhǎng)出島狀細(xì)胞株，越2周

        6、克隆耐藥細(xì)胞，檢測(cè)目基因的存在與表達(dá)。

    二、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

        （1）宿主細(xì)胞

        （2）表達(dá)載體的構(gòu)建

        （3）表達(dá)細(xì)胞株的基因共壙增和篩選方法

        （4）可調(diào)控的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

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