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蛋白表達(dá)服務(wù)介紹

2015-07-27
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美迪西蛋白表達(dá)服務(wù)優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)周期短、成本低、產(chǎn)量高。蛋白表達(dá)是指用模式生物如細(xì)菌、酵母、動(dòng)物細(xì)胞或者植物細(xì)胞表達(dá)外源基因蛋白的一種分子生物學(xué)技術(shù)。在基因工程技術(shù)中占有核心地位。

重組蛋白表達(dá)與純化服務(wù)

主要方式:大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、植物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

蛋白表達(dá)與純化(1)



主要表達(dá)系統(tǒng)介紹:

1、原核表達(dá)系統(tǒng):將克隆化基因插入合適載體后導(dǎo)入大腸桿菌用于表達(dá)大量蛋白質(zhì)的方法一般稱為原核表達(dá)。這種方法在蛋白純化、定位及功能分析等方面都有應(yīng)用。

    美迪西科研人員建立了成熟的大腸桿菌表達(dá)及純化服務(wù)平臺(tái),提供包括各種重組蛋白以及其復(fù)合物在大腸桿菌中的表達(dá)與純化服務(wù)。

    服務(wù)項(xiàng)目:

    重組質(zhì)粒構(gòu)建;

    重組表達(dá)測(cè)試;

    可溶性表達(dá)條件測(cè)試;

    小規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(2L培養(yǎng)基培養(yǎng)產(chǎn)物);

    大規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(10L以上)。 

原核表達(dá)一般程序:獲得目的基因=》準(zhǔn)備表達(dá)載體=》將目的基因插入表達(dá)載體中(測(cè)序驗(yàn)證)=》轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌=》誘導(dǎo)靶蛋白的表達(dá)=》表達(dá)蛋白的分析=》擴(kuò)增、純化、進(jìn)一步檢測(cè)。


優(yōu)點(diǎn):原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)既是最常用的表達(dá)系統(tǒng),也是最經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為代表,具有遺傳背景清楚、成本低、表達(dá)量高和表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對(duì)簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn);

缺點(diǎn):主要是蛋白質(zhì)翻譯后缺乏加工機(jī)制,如二硫鍵的形成、蛋白糖基化和正確折疊,得到具有生物活性的蛋白的幾率較小。


2、酵母表達(dá)系統(tǒng):酵母表達(dá)系統(tǒng)作為一種后起的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng),由于兼具原核以及真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn),正在基因工程領(lǐng)域中得到日益廣泛的應(yīng)用,應(yīng)用此系統(tǒng)可高水平表達(dá)蛋白,且具有翻譯后修飾功能,故被認(rèn)可為一種表達(dá)大規(guī)模蛋白的強(qiáng)有力的工具。

    美迪西科研人員建立了成熟的酵母表達(dá)純化服務(wù)平臺(tái),提供優(yōu)質(zhì)的重組蛋白在畢赤酵母和釀酒酵母中的表達(dá)與純化服務(wù)。

    服務(wù)項(xiàng)目:

    重組酵母表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建;

    重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化;

    重組表達(dá)子篩選;

    小規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(2L培養(yǎng)基培養(yǎng)產(chǎn)物);

    大規(guī)模蛋白表達(dá)和純化(10L以上)。 

優(yōu)點(diǎn):酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)以甲醇畢赤酵母為代表,具有表達(dá)量高,可誘導(dǎo),糖基化機(jī)制接近高等真核生物,分泌蛋白易純化,易實(shí)現(xiàn)高密發(fā)酵等優(yōu)點(diǎn)。

缺點(diǎn):為部分蛋白產(chǎn)物易降解,表達(dá)量不可控。


3、哺乳動(dòng)物細(xì)胞和昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng):哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)外源重組蛋白可利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和病毒載體的感染。利用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染細(xì)胞需幾周甚至幾個(gè)月時(shí)間,而利用病毒表達(dá)系統(tǒng)則可快速感染細(xì)胞,在幾天內(nèi)使外源基因整合到病毒載體中,尤其適用于從大量表達(dá)產(chǎn)物中檢測(cè)出目的蛋白。

優(yōu)點(diǎn):是蛋白翻譯后加工機(jī)制最接近體內(nèi)的天然形式,最容易保留生物活性。

缺點(diǎn):是表達(dá)量通常較低,穩(wěn)定細(xì)胞系建立技術(shù)難度大,生產(chǎn)成本高。


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